检测原理

 基于聚合酶链式反应（PCR）的核酸探针技术能灵敏、特异的检测目标DNA序列，然而这些核酸探针，如Taqman探针、分子信标探针等一般都需要荧光基团和淬灭基团的化学修饰，合成成本相对高昂，所用到的仪器如实时荧光定量PCR仪，较为高端，因此这些方法的普适性不强。 

 中国科学院成都生物研究所唐卓课题组的巴基斯坦籍博士后Afshan Yasmeen等人通过研究建立了一种新的基于串联PCR和绿色荧光蛋白（GFP）RNA类似物以及小分子荧光基团的特异性DNA检测方法。该检测方法使用小分子荧光基团作为传感器，不需要对探针进行化学修饰，灵敏度高，特异性强，且能通过灵活选择不同RNA适配体和小分子荧光基团得到不同荧光报告信号，来实现单个或多个目标DNA的检测。 

 该方法原理如下：首先，在对目标DNA进行PCR时，由于Taq DNA聚合酶具有5’-3’的外切酶活性，它能在引物的延伸过程中于探针和目标DNA杂交的位置将探针的5’突出末端剪切，产生一个小DNA片段。此片段释放出来后可作为反应体系中另一个DNA模板 -- 报告模板的引物，进一步启动报告模板的PCR。报告模板为编码RNA适配体--绿色荧光蛋白（GFP）RNA类似物--的序列，在PCR结束后，报告模板的PCR产物可以转录mRNA，在相应的荧光基团存在下可以产生荧光信号。该方法已成功应用于大肠杆菌和产气荚膜梭菌的检测中。 

 该工作已发表在ACS Chemical Biology。 

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