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成都生物所建立了一种基于串联PCR和小分子荧光基团的特异性DNA检测方法
发表日期: 2016-06-27 作者: 杜凤 文章来源:天然药物室
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  检测原理

 基于聚合酶链式反应(PCR)的核酸探针技术能灵敏、特异的检测目标DNA序列,然而这些核酸探针,如Taqman探针、分子信标探针等一般都需要荧光基团和淬灭基团的化学修饰,合成成本相对高昂,所用到的仪器如实时荧光定量PCR仪,较为高端,因此这些方法的普适性不强。 

 中国科学院成都生物研究所唐卓课题组的巴基斯坦籍博士后Afshan Yasmeen等人通过研究建立了一种新的基于串联PCR和绿色荧光蛋白(GFPRNA类似物以及小分子荧光基团的特异性DNA检测方法。该检测方法使用小分子荧光基团作为传感器,不需要对探针进行化学修饰,灵敏度高,特异性强,且能通过灵活选择不同RNA适配体和小分子荧光基团得到不同荧光报告信号,来实现单个或多个目标DNA的检测。 

 该方法原理如下:首先,在对目标DNA进行PCR时,由于Taq DNA聚合酶具有5-3’的外切酶活性,它能在引物的延伸过程中于探针和目标DNA杂交的位置将探针的5’突出末端剪切,产生一个小DNA片段。此片段释放出来后可作为反应体系中另一个DNA模板 -- 报告模板的引物,进一步启动报告模板的PCR。报告模板为编码RNA适配体--绿色荧光蛋白(GFPRNA类似物--的序列,在PCR结束后,报告模板的PCR产物可以转录mRNA,在相应的荧光基团存在下可以产生荧光信号。该方法已成功应用于大肠杆菌和产气荚膜梭菌的检测中。 

 该工作已发表在ACS Chemical Biology 

 原文链接 

 

  图为论文的第一作者--巴基斯坦籍博士后Afshan Yasmeen 


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